一、全自動(dòng)洗板機(jī)常用沖洗液種類及配比
1. 基礎(chǔ) PBST 洗滌液(ELISA 通用)
基礎(chǔ)緩沖液:0.01mol/L PBS 磷酸鹽緩沖液 添加助劑:0.05% 吐溫 - 20 配比參考(1L 體系):
PBS 干粉按說明溶解于 1L 純化水,攪拌至完全溶解;
量取 0.5mL 吐溫 - 20 緩慢加入緩沖液,低速攪拌混勻,避免大量起泡。
2. 無酶潔凈沖洗液(蛋白高靈敏檢測(cè))
僅使用無菌純化水配制 PBS,不加吐溫,減少非特異性吸附,適用于低濃度抗原檢測(cè)。
3. 酸性清洗液(管路除垢、去蛋白殘留)
純化水加稀鹽酸調(diào)配 pH 至 2.0~3.0,僅用于管路維護(hù)清洗,不可直接洗實(shí)驗(yàn)微孔板。
4. 堿性除垢液(清除結(jié)晶鹽沉淀)
低濃度氫氧化鈉稀釋液,僅定期循環(huán)沖洗管路,洗完必須純水沖凈殘留堿液。
二、標(biāo)準(zhǔn)配置操作要點(diǎn)
用水要求 統(tǒng)一使用純化水 / 超純水,禁止自來水,水中鈣鎂離子易在管路、針閥形成結(jié)晶堵塞。
溶解順序 先配緩沖鹽溶液,充分溶解后再添加吐溫等表面活性劑;吐溫少量多次添加,防止泡沫過多。
儲(chǔ)存條件 現(xiàn)配現(xiàn)用最好;短期 2~8℃冷藏可存放 3 天,出現(xiàn)渾濁、分層、異味直接廢棄。
消泡控制 吐溫濃度不可超過 0.1%,泡沫過多會(huì)造成洗板機(jī)溢液、洗板量不準(zhǔn)、背景值升高。
三、全自動(dòng)洗板機(jī)使用規(guī)范
(一)上機(jī)裝填要求
沖洗液倒入設(shè)備專用儲(chǔ)液瓶,液面不超過最大刻度,預(yù)留消泡空間;
管路吸液管完全浸沒液面,避免吸入空氣產(chǎn)生氣泡,造成洗板不均;
廢液瓶提前清空,預(yù)留充足容量,防止廢液倒灌污染管路。
(二)實(shí)驗(yàn)洗板參數(shù)匹配
常規(guī) ELISA:浸泡 30~60s,每孔注液量 300~350μL,洗板 4~5 次;
強(qiáng)吸附蛋白微孔板:增加浸泡時(shí)間與洗滌次數(shù),提升去除未結(jié)合抗原抗體效果;
沖洗液溫度保持室溫 20~25℃,低溫緩沖液會(huì)增大蛋白吸附,拉高實(shí)驗(yàn)背景。
(三)實(shí)驗(yàn)中途補(bǔ)液規(guī)范
如需中途添加沖洗液,補(bǔ)充后執(zhí)行一次管路潤(rùn)洗程序,排出管路內(nèi)濃度不均的液體,再繼續(xù)檢測(cè)。
四、實(shí)驗(yàn)后管路清洗流程
先用配置好的沖洗液循環(huán)沖洗管路 1min;
更換超純水,整機(jī)管路、清洗針、廢液通道徹底潤(rùn)洗,沖凈緩沖鹽殘留;
長(zhǎng)期停機(jī)前,使用酸性清洗液循環(huán)除垢,再純水沖凈,排空管路殘留液體,防止鹽類結(jié)晶堵塞洗板針。
五、常見問題與管控要求
背景值偏高:吐溫濃度不足、沖洗液過期、洗滌次數(shù)不夠,重新配制洗滌液并優(yōu)化洗板程序;
洗板針堵塞:長(zhǎng)期未純水沖管、緩沖鹽結(jié)晶,定期酸堿液循環(huán)保養(yǎng);
大量泡沫溢出:吐溫添加過量、攪拌劇烈,重新配制低濃度 PBST,減少注液流速;
交叉污染:沖洗液長(zhǎng)期重復(fù)使用,嚴(yán)格執(zhí)行現(xiàn)配現(xiàn)用,每日更換儲(chǔ)液。
六、安全注意事項(xiàng)
全自動(dòng)洗板機(jī)酸堿維護(hù)清洗液分開存放,操作時(shí)佩戴手套;酸堿沖洗管路后必須多級(jí)純水沖洗,殘留酸堿會(huì)腐蝕洗板機(jī)金屬管路、損傷微孔板涂層。